双分子荧光互补BiFC技术服务

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双分子荧光互补BiFC技术服务

双分子荧光互补 (Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)是一项可直观、快速判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术。该技术利用在荧光蛋白特定位点插入外源片段而不影响GFP荧光活性的特性,在其分割为两个无荧光活性的蛋白片段, 即N端片段(N-fragment)和C端片段(C-fragment),当能够发生相互作用的两个蛋白分别与N端片段和C端片段连接形成融合蛋白并在活细胞中共同表达时, 荧光蛋白的N端片段与C端片段就能够相互靠近, 重新形成活性的荧光基团而发出荧光。

 

服务流程

1、构建包含目的蛋白的质粒
需客户确认目的蛋白接在荧光蛋白的N端还是C端。
2、重组目的质粒转化农杆菌;
3、农杆菌菌液注射烟草叶片;
4、共聚焦显微镜观察和拍照。

双分子荧光互补

BiFC系统:

1. Split fluorescent protein (YFP)普通型:
该系统适合蛋白相互作用较强的蛋白互作研究,YFP荧光强度控制在较低的水平,不受背景等因素干扰。

2. Split fluorescent protein (YFP)增强型:
该系统适合膜蛋白互作等蛋白之间相互作用较弱的蛋白互作研究,YFPn和YFPc经过人工编辑,YFP荧光增强,便于观察互作弱的荧光信号。同时对206位氨基酸A进行突变成K,降低了背景等因素干扰,结果真实可靠。

3. The Split luciferase (LUC)system:
该系统可以对活体系统观察拍照,尤其可进行定量分析,比较互作强弱,适合蛋白互作受第三方物质影响的互作研究,如蛋白互作的强弱能够被激素、小分子化合物等调节,通过外源添加激素化合物等观察判定互作的强弱变化。

双分子荧光互补检测服务
1. 表达质粒构建 周期 交付数据及材料 报价
  • 基因优化
  • 亚克隆设计
  • 合成基因
  • 亚克隆至载体
载体构建
1-2周
1、完整的实验报告,包括新金沙的实验步骤及结果
2、原始图片,包含YFP、 DIC、Merge
3、构建好的质粒及农杆菌

请联系order@zoonbio.com

技术支持电话
400-066-8086

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2. BiFC实验
  • 农杆菌转化
  • 互作蛋白瞬时表达
  • 实验结果观察拍照
表达鉴定
3-4 周