蛋白表达纯化

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蛋白表达纯化

基因优化

Ⅰ.保持完整的mRNA结构,兼顾5-UTR和3-UTR 对翻译的影响
Ⅱ. tRNA丰度,采用与tRNA丰度呈正相关性的同义密码子,蛋白的翻译和准确性更高
Ⅲ.运用更接近于表达系统的密码子,降低转录和翻译的难度,提高表达效率通过优化,超过85%基因选择的载体中得到表达。

多载体和菌种选择

载体选择 PET 系列,pMAL, pCZN ,pGEX(GST), pSumo
宿主菌的选择 Aritic Express,BL21(DE3)plys系列, Trans B(DE) 3, Rosseta,Origami B系列

纯化方式

His、GST、MBP、离子、分子筛及其他

原核技术服务类型

类型 表达条件 结果 交付形式 备注
无要求蛋白交付 转化AE或者plys,进行37℃,0.4mM IPTG 诱导4hr 转化AE或者plys表达鉴定,如果表达则纯化,不表达则结束或者进行后续方案 纯度不低于85%,浓度不低于0.3mg/ml 溶液或者冻干 接受客户提供质粒和菌种
蛋白交付保证型 进行37℃,0.4mM IPTG 诱导4hr 转化AE如果不表达转化plyss鉴定,如果表达则纯化,不表达则结束或者进行后续方案 纯度不低于85%, 浓度不低于0.3mg/ml溶液或者冻干 建议不接受客户提供的质粒和菌种,如果客户提供,加收鉴定费用
上清蛋白交付保证型 11,20,37三个温度,pczn、pet、trx或者MBP融合载体条件优化,如果融合进行酶切获得蛋白 先尝试低温,根据订单要求,递进式进行条件优化选择 纯度不低于85%,浓度不低于0.5mg/ml溶液或者冻干 建议不接受客户提供的质粒和菌种
表达条件优化 11,20,37三个温度,IPTG 0.1,0.5 1mM优化 确定最优条件 报告 接受客户提供质粒和菌种

 

原核蛋白表达注意事项

1. 对于膜蛋白,激酶,病毒蛋白,受体蛋白,分子量过大(100kd)或者分子量过小(8kd)的蛋白,大肠杆菌表达的成功率比较低,根据客户对蛋白的用途,建议客户采用合适的系统,或者采用融合或者截断表达。
2. 后续蛋白做互作的,建议客户做上清表达套餐,或者采用烟草共表达体系。
3. 对于酶切蛋白,要咨询好融合蛋白是否接受,如果接受,我们会在酶切的同时,会制备足够的融合蛋白。
4. 去内毒素蛋白可达到1EU/ug标准,费用额外加收一定费用。
5. 对于做ELISA筛选的蛋白,建议客户上清表达蛋白。
6. 可分泌表达羊驼抗体,客户提供序列即可,目前我们有成功表达案例。

原核表达优势

1、基因优化系统
2、低温启动子,上清表达效率高
3、自诱导优化体系,可明显可溶性蛋白的表达量
4、分泌表达,可表达小分子抗体
5、快,1-3mg最快5个工作日交付
6、可提供蛋白-抗体一体化服务