微滴式数字PCR技术服务

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微滴式数字PCR技术服务

ddPCR技术是一种全新的核酸检测方法,通过将反应体系均分到大量反应单元中,独立进行PCR扩增,检测每个反应单元的荧光信号(荧光信号产生过程参考qPCR), 根据泊松分布和阳性比例计算核酸数量。数字PCR是一种新型的绝对定量PCR,拥有灵敏度高,定量准确,检测的线性范围宽,特异性好,成本低等优点,是一种很有发展的分子定量检测方法。

微滴式数字PCR原理:
微滴式数字PCR系统在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理,即将含有核酸分子的反应体系分成数万个纳升级的微滴,其中每个微滴或不含待检核酸靶分子,或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后,对每个微滴的荧光信号进行逐一分析,阳性微滴意味着至少含有1个DNA或cDNA分子。分析软件根据每个样品中阳性微滴/总微滴的数目,基于泊松分布,计算出靶分子的浓度(copies/uL)。

微滴式数字PCR工作流程

微滴式数字PCR工作流程图

1.配制反应液
将引物、探针、DNA模板、ddPCR supermix配制成20ul反应液,加入到微滴发生卡上。
2.制备微滴
将微滴反生卡放入微滴生成器,在1.5分钟内将每个20ul反应液分成20000个微滴。
3.PCR扩增
将微滴转移到96孔PCR板上,于PCR仪上进行扩增。
4.检测微滴及数据分析
将96孔板放入微滴分析仪,顺序吸取每个样品的微滴并随载液流逐一通过双色检测。

微滴式数字PCR技术服务的优势:
1、真正的绝对定量,无需外参标准品及标准曲线,数据重复性更好。
2、更高的准确性,不再依赖PCR效率,抑制剂耐受度高,模板适用度广。
3、更高的分辨率,可识别1.1倍浓度差异,适合CNV等类型实验。
4、更高的灵敏度,单拷贝,0.001% ,适合单细胞基因表达、病原微生物及低频突变检测等。
5、兼容染料法和探针法,一定程度上解决探针法非特异性问题及染料法引物二聚体问题。

钟鼎生物微滴式数字PCR服务 

微滴式数字PCR技术服务
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1个基因/样品 1-2周
2个基因/样品 1-2周
3个基因/样品 1-2周
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1、建议使用荧光探针法。
2、使用SYBR-Green染料法进行实验时,每个样品会依据样品来源配套特异性内参,三个复孔重复。