羊驼单域抗体sdAb-纳米抗体

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羊驼单域抗体制备

    钟鼎生物的技术总监是国内首批研究单域抗体的科学家之一,拥有十余年纳米抗体制备经验。随着抗体药物研究方兴未艾,研究机构和医药企业需求日益增多。应客户之急迫需求,我们在南京建立了羊驼饲养繁育基地,拥有健康适龄、免疫背景清晰、父系种源可查的羊驼 20 余只,配备专业的兽医和饲养设施。

南京羊驼饲养基地,客户可亲临养殖基地取样,监督免疫,实时查看实验动物状态;

  • 针对不同客户的预算需求,我们提供多种服务模式:可提供空白羊驼进行免疫,亦可使用重复免疫的动物(不同抗原免疫小于 3 种);
  • 灵活的交付模式: 可提供血清或动物脾脏(客户可亲临养殖基地取样,监督免疫);
  • 客户自行购买羊驼,委托我公司代为饲养或免疫。

羊驼纳米抗体制备

钟鼎生物拥有成熟的蛋白定制平台,依据项目要求,可选原核表达体系,哺乳动物表达体系,杆状病毒-昆虫细胞体系,配合AKATA纯化设备可以制备纯度大于95%,浓度大于2mg/ml的蛋白免疫原,保证满足免疫需求。

单克隆抗体制备服务列表

免疫周期表
服务说明 时间列表 实验安排

动物要求

雌性健康羊驼一只
15 ~ 20 月龄
体重50 kg 左右

抗原要求

浓度大于 95 %
浓度 2 mg/ml 2ml
如具致病性请提前告知
不含叠氮化钠
0-2天 免疫原检测,免疫前采血,预留阴性血清
3天 完全弗氏佐剂混合抗原乳化,皮下多点免疫
25天 不完全弗氏佐剂混合抗原乳化,皮下多点免疫
32天 采外周血,ELISA 检测抗血清效价
46天 不完全弗氏佐剂混合抗原乳化,皮下多点免疫
52天 采外周血,ELISA 检测抗血清效价
65天 不完全弗氏佐剂混合抗原乳化,皮下多点免疫
采集 50 ml 外周血,用于纳米抗体库构建

不是所有的抗原都能使动物产生免疫应答,根据我们的经验,如果经过 3~4 次免疫后检测血清效价(OD450≈1.0)小于 5000,我们建议客户终止项目。

抗原的要求
1. 抗原纯度 高纯度的抗原在产生免疫应答与筛选过程至关重要,因此建议客户抗原纯度在 95% 以上。我们在收到客户抗原后,会通过 SDS-PAGE 检测抗原纯度。
2. 抗原量及安全性 根据不同抗原,需要客户提供不同量的抗原,请提前与技术人员沟通。同时客户不得隐瞒抗原是否具有致病、致死危险,如有隐瞒且造成实验动物死亡客户需要额外支付动物和项目成本费。
3. 抗原浓度 抗原浓度保证在 2 mg/mL,且不含叠氮钠。建议使用干冰运输至我公司。

纳米抗体相关服务

构建噬菌体抗体库 周期:3-4周
第四次免疫结束后,从静脉抽取50mL全血,用于分离外周血淋巴细胞; 抗体库质量:1)插入率﹥95%,随机挑取48个克隆测序,没有重复序列 2)抗体库容量达到107~108次方
向客户提供质检报告与抗体库

抗体库筛选 周期:3周
根据项目实际情况,选择不同的筛选方案,如竞争筛选,固相筛选,液相筛选,负筛选等筛选方法。
免疫抗体库,每轮筛选后挑取24个克隆进行鉴定;
向客户提供5个以上的特异性克隆;

纳米抗体表达纯化 周期:2 周
将纳米抗体基因克隆至真核或原核表达载体;向客户提供高纯度纳米抗体;

亲和力测定 周期:1周
采用biocore测定抗体的亲和力