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原核蛋白表达体系
高效表达菌株,大大提高蛋白可溶表达几率!
公司新闻

1、热烈祝贺钟山生命科学园更名,园区环境大幅改善。

2、2015年12月,钟鼎生物正式获批“企业研究生工作站”,“江苏省高科技企业”等一系列称号。

3、2015年8月,钟鼎生物正式获批“国家级高新科技企业”殊荣。more

原核蛋白表达实验实例——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系技术支持

我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,我们的客户可以直接使用钟鼎生物提供的实验数据和图片用于论文撰写和发表,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。

 

pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系

实验描述      
    利用基因合成、cDNA克隆、反转录等方法,获得目的基因,将目的基因亚克隆至表达载体pCzn1,目的基因在N端融合His标签蛋白,通过测序和酶切验证,确证获得亚克隆正确的表达质粒。
    利用构建好的表达质粒,转化Arctic Express宿主菌, 在11度低温IPTG诱导条件下,SDS-PAGE检测目标蛋白表达情况,确认蛋白分布在上清或是沉淀中。
    如果目标蛋白产物分布与上清中,通过Ni柱亲和纯化, 获得目的蛋白;如果目标蛋白分布于沉淀中,则通过包涵体梯度洗脱后,重溶获得目标蛋白,必要的话,重溶蛋白在进一步通过亲和纯化提高纯度。
测序验证      
序列比对      
序列比对
重组质粒酶切      
  酶切鉴定 Marker:250,500,750,1000,1500,2000,3000,5000
基因名称:XXXX
克隆编号:G1XXX-1
酶切鉴定:BamHI/HindIII
OD260/OD280: 1.85
 
蛋白表达分析鉴定(11度低温诱导体系)    

 

蛋白表达鉴定

   蛋白诱导表达鉴定

泳道M:蛋白marker

泳道1:诱导前

泳道2:诱导后全菌(克隆子1)

泳道3:诱导后全菌(克隆子2)

泳道4:诱导后沉淀

泳道5:诱导后上清

 
重组蛋白亲和纯化(Ni亲和树脂一步亲和纯化)    

 

蛋白亲和纯化

   蛋白Ni-IDA柱亲和纯化

泳道M:蛋白Marker

泳道1:诱导后上清

泳道2:流出液

泳道3:洗脱液

 
备注:上述实验图片是新金沙原核蛋白表达实验的标准交付图片,具体的订单双方协商确认。  

 

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