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公司新闻

1、热烈祝贺钟山生命科学园更名,园区环境大幅改善。

2、2015年12月,钟鼎生物正式获批“企业研究生工作站”,“江苏省高科技企业”等一系列称号。

3、2015年8月,钟鼎生物正式获批“国家级高新科技企业”殊荣。more

蛋白质纯化技术服务

蛋白质纯化是一项复杂的过程,包括粗分离、初步纯化和精细纯化等多个步骤。实验方法包括抽提、沉淀、离心、层析等多种手段。钟鼎生物拥有顶尖的蛋白纯化技术人员,可以根据蛋白性质设计亲和纯化、离子交换、分子筛、疏水和反相等多种蛋白纯化实验方案,获得初步纯化的蛋白质,再通过制备级别的HPLC获得纯度高达99%以上的纯品蛋白,获得的纯品蛋白可以满足蛋白质折叠、重结晶等精细实验要求。

蛋白质纯化技术服务

蛋白质纯化服务列表

蛋白质纯化服务项目
重组蛋白纯化
标签蛋白的酶切及分离纯化 使用商品化的亲和纯化树脂,分离纯化带有6xHis、GST、SUMO、MBP融合蛋白,获得纯度85%以上融合蛋白,该方法操作简便、成本易控制、蛋白得率在70%以上。
携带标签的重组蛋白纯化 使用诸如肠激酶、凝血酶、SUMO酶等蛋白酶,切除标签蛋白,再进一步分离纯化目标蛋白。
包涵体变复性纯化 将包涵体变复性操作,将不溶的包涵体重新折叠至可溶状态,溶解于PBS或tris HCl缓冲液,鉴于部分蛋白的性质特殊,不承诺所有的蛋白都可以透析去除盐溶液。
服务说明:客户委托钟鼎生物进行重组蛋白分离纯化时,需提供表达菌株或表达产物(双方可签署保密协议以保障客户知识产权),同时提供重组蛋白表达实验相关背景。钟鼎生物承诺交付双方约定的纯度及质量的纯品蛋白质,如我们无法完成实验或达不到约定的要求,则不收取任何费用。
天然蛋白纯化
天然大分子蛋白分离纯化
结合待分离的蛋白理化性质,适当选用适合孔径的分子筛截留分离纯化,配合阴离子柱或阳离子柱,使用HLPC分离设备,收取指定洗脱峰,可以获得纯度95%以上的天然蛋白。
天然小肽分离纯化 通过分子筛初步截留大分子蛋白,使用大孔树脂或反向树脂纯化小分子化合物,进一步通过HPLC和MS对小肽分子鉴定,由于小肽分子一般含量较低,获得的蛋白量较少。
未知蛋白混合物分离纯化 客户需告知带分离蛋白的基本特性,由钟鼎分离纯化,最终通过质谱鉴定,活性鉴定等多种方案确认分离产物。
服务说明:客户委托钟鼎生物进行天然蛋白的分离纯化时,需提供目的蛋白的大致分子量范围,蛋白缓冲液成份,天然蛋白的相关背景资料。大规模纯化之前,需安排预实验进行小试,无论预实验是否能分离到目的蛋白,我们会收取预实验的实验成本费用,大规模分离时,依据小试的实验条件核定报价。

 

原核表达服务案例

1.Ni柱亲和纯化
本案例使用IPTG诱导表达目的蛋白,优化表达条件,将诱导条件调整至11度,经分析目标蛋白主要呈包涵体形式,上清中有少量表达,因此通过变复性的方式,重溶目标蛋白,通过Ni柱亲和纯化获得目的蛋白。

从SDS-PAGE图中看出,亲和纯化后的蛋白杂带明显减少,目的蛋白得到纯化。

2.离子交换纯化
根据客户提供的样品,选择合适的pH的溶液,进行硫酸铵分级沉淀,sds-page鉴定各组份。将含有目的蛋白的组份透析到pH8.0的溶液中,进行离子纯化。

从SDS-PAGE图中看出,通过高分辨率的mono Q梯度洗脱能分离出目的蛋白,可以满足后续的实验要求。

3.分子筛纯化
经分析目标蛋白主要呈包涵体形式表达,对包涵体处理后,用分子筛的方式进行纯化,SDS-PAGE鉴定目标蛋白。

将得到的蛋白进行Western Blot验证,WB结果表明纯化得到的蛋白即为客户需要的目的蛋白,将得到的目的蛋白去除内毒素或分装冻干,冻干蛋白用蛋白裂解液复溶后进行鉴定。

WB结果和SDS-PAGE分析图表明目的蛋白的到纯化。

蛋白表达是是现代工业、医疗和基础研究领域的重要组成部分,也是当前生物技术的难点和热点,钟鼎生物利用自身的载体及技术优势,经过4年的积淀,累计成功为国内外制药企业和科研院所表达了1000余种蛋白。我们的11度低温诱导原核表达体系可以更大概率获得可溶蛋白,使得重组蛋白的活性几率大幅提高;钟鼎的酵母表达体系,无需甲醇诱导,操作简便,绿色环保,大量的实验案例及文献可供参考。


蛋白表达技术服务

钟鼎生物资质

 

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