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原核蛋白表达体系
食品级表达载体,力争高纯度,高活性表达!
公司新闻

1、热烈祝贺钟山生命科学园更名,园区环境大幅改善。

2、2015年12月,钟鼎生物正式获批“企业研究生工作站”,“江苏省高科技企业”等一系列称号。

3、2015年8月,钟鼎生物正式获批“国家级高新科技企业”殊荣。more

原核蛋白表达纯化服务(乳酸菌体系)

  乳酸乳球菌是一种同型发酵细菌,此类菌可实现乳糖到乳酸的迅速转化。其功能特征诸如球菌的碳代谢、胞外胞内蛋白水解系统、抗生素产生、噬菌体的相互作用及抗性均被广泛研究,促成了乳球菌在生物技术方面的广泛应用。钟鼎生物的蛋白表达核心技术和资源优势决定了我们卓尔不凡的服务品质。我们引入完善的乳酸菌表达系统,构建成熟载体,为您提供高质量重组蛋白表达定制服务。

乳酸菌表达体系

原核表达技术服务概述

  钟鼎生物的原核蛋白表达技术日臻成熟,于2016年建立了基于Nisin诱导的NICE系统的乳酸菌表达平台,在此基础上可根据客户需求,提供多种表达方案,包括热诱导表达、食品级别表达以及分泌型表达。竭尽全力为您提供高上清、高纯度、高活性的乳酸菌蛋白表达服务。

乳酸菌表达项目

Nisin诱导的乳酸菌蛋白表达体系简介

1、Nisin介绍
  Nisin即乳酸链球菌素(亦称乳链菌肽),由34个氨基酸组成一种天然生物活性抗菌肽,是利用生物技术提取的一种纯天然、高效、安全的多肽活性物质。对包括食品腐败菌和致病菌在内的许多革兰氏阳性菌具有强烈的抑制作用,食用后在消化道中很快被蛋白水解酶消化成氨基酸。它不会改变肠道内的正常菌群,不会引起抗药性问题。是目前世界上唯一被允许用作食品添加剂的细菌素。

2、Nisin诱导原理
  天然的乳链菌肽Nisin有两个变异体:NisinA和NisinZ。这两个变异体的差异仅是乳链菌肽分子第27位上的氨基酸不同,NisinA的是组氨酸(His),而NisinZ则是天冬酰氨(Asn)。 与Nisin合成有关的基因有11个,构成一个基因簇nisA(Z)BTCIPRKFEG。这些相关基因组成三个操纵子进行转录,分别是nisA(Z)BTCIP、nisRK和nisFEG。Nisin通过NisRK双组分调节系统诱导自身合成,而NisI和NisFEG赋予了Nisin产生菌对Nisin的免疫性。

3、Nisin的表达系统的设计基础
  目前表达菌株基本上都是基于乳酸球菌MG1363改造的,这是一个从乳品发酵体系中分离的菌株NCDO712的后代,本身不含有任何质粒,且对乳酸链球菌素不敏感的乳酸球菌,将上述Nisin基因中NisRK双组分调节系统整合至MG1363的基因组中,构建的表达质粒携带PnisA启动子,我们只要将目的基因置于PnisA启动子之后,就可以在Nisin的诱导下,激活细胞表达目的基因。

Nisin诱导系统原理

4、 乳酸乳球菌表达载体及菌株
  客户可自行提供表达载体及菌株,或委托钟鼎生物代为购买Mobitec公司的标准NICE表达系统,该系统包含完整的表达载体及表达菌株。我们由官方正规渠道购买,仅用于客户的科研工作,产品专利归生产商Mobitec及开发商NIZO所有。

原核表达服务标准

乳酸菌蛋白表达步骤及交付标准
1、表达体系系统选择(客户提供表达菌株的略过此步骤,仅提供表达质粒的可选择宿主菌)
可选表达体系
① Nisin诱导标准体系:PNZ8148标准载体+NZ9000标准菌株;
② Nisin诱导食品级表达体系:PNZ8149食品级载体+NZ3000/3900食品级菌株;
2.1 表达质粒构建 交付数据及材料
周期及报价
  • 基因优化
  • 亚克隆设计
  • 合成基因
  • 亚克隆至载体
1、基因合成报告
2、测序验证报告
3、包含表达质粒的克隆菌株(可选)
4、表达质粒
5、质粒说明书

乳酸菌蛋白表达服务属于科研型服务项目,为了给您提供更专业、细致的服务支持

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2.2 蛋白表达小试分析鉴定  
  • 电转化
  • 表达小试
  • 表达分析鉴定
  • 扩大培养
6、阳性表达菌株
7、小试表达流程报告
8、小试表达分析原始图片
9、小试表达总结
2.3 蛋白表达纯化  
  • 蛋白亲和纯化(胞外或胞内)
  • WB鉴定纯化后蛋白
  • PFM检测(可选)
  • MS检测(可选)
10、蛋白纯化流程报告
11、蛋白纯化原始图片
12、发货蛋白
13、Western Blot(标签抗体)
14、蛋白指纹图谱(可选)
15、蛋白质谱分子量(可选)
2.4 发酵罐放大培养  
  • 放大培养(10-20L)
  • 放大培养(50L以上)
16、蛋白纯度鉴定报告
17、成品蛋白(依据表达小试结果约定价格)

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钟鼎生物资质

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