当前位置:首页技术服务定制类技术服务重组蛋白表达技术服务原核蛋白表达纯化服务(大肠杆菌)
(定制类)技术服务
(检测类)技术服务

原核蛋白表达体系
高效表达菌株,大大提高蛋白可溶表达几率!
公司新闻

1、热烈祝贺钟山生命科学园更名,园区环境大幅改善。

2、2015年12月,钟鼎生物正式获批“企业研究生工作站”,“江苏省高科技企业”等一系列称号。

3、2015年8月,钟鼎生物正式获批“国家级高新科技企业”殊荣。more

原核蛋白表达纯化服务(大肠杆菌体系)

  生命科学进入后基因组时代,在许多科研项目中,获得具有空间结构和生物学活性的重组蛋白是非常关键的步骤。通过大肠杆菌E.coli体系获得重组蛋白,具有成本低、操作简便等优点,能够大幅的降低实验成本。但是大量的蛋白在原核体系统中会由于各种原因而导致无法在上清中获得可溶蛋白:例如稀有密码子含量太高而导致不表达或蛋白表达水平低;重组蛋白形成包涵体,无法在细胞上清中形成可溶蛋白;纯化的蛋白极易发生沉淀,得到的蛋白纯度无法满足实验需要;内毒素含量超标,无法满足细胞实验等等。

  钟鼎生物的蛋白表达核心技术和资源优势决定了我们卓尔不凡的 服务品质,我们构建了带有His标签(pCzn1-His原核表达载体)和Sumo标签的特色质粒,同时筛了低温诱导体系的Arctic Express高效表达菌株,可以在11℃超低温诱导表达,大大提高了蛋白可溶表达的几率,增加了表达成功率和原核蛋白产物的活性几率。我们也收集了大量经典的商业化表达载体及表达菌株,可以根据客户需要构建如GST、Trx、MBP融合标签,尝试BL21(DE3),Origami系列菌株!

>> 拥有自主开发的高效表达表达载体和菌株,超低温条件诱导,最大程度保持蛋白可溶性;
>> 具有数十种商业表达载体和自主开发的pCzn1/pSumo-Mut载体,熟练运用多种表达宿主菌,可以根据实际需要,选用不同融合标签蛋白、不同抗性、不同作用元件的表达载体和不同性质的表达宿主;
>> 蛋白提取及纯化实验全程低温洁净环境操作,低温发货,保证蛋白品质;
>> Western Blot和质谱分析(可选)进一步验证蛋白的正确性。
>> 提供原始的实验图片及数据,客户无需重复实验可直接用于文章的撰写与发表。

  钟鼎生物拥有万级的细胞培养实验室,完整的蛋白表达、鉴定及蛋白纯化实验标准程序和软硬件设施。我们开放的实验室,欢迎广大的客户参观指导;经过技术转让预约后,我们也允许参与实验,交流实验经验!参观预约请电联:025-84448440-608 或 Email: order@zoonbio.com

蛋白表达实验实验室

  钟鼎生物自主开发的原核蛋白表达体系,可实现低温诱导表达,欢迎下载查看经典案例。

    

pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系

查看实验实例

pSumo-mut质粒+Arctic Express宿主菌低温诱导表达体系

查看实验实例

pCzn1蛋白表达质粒

点击下载载体说明书

pSumo蛋白表达质粒

点击下载载体说明书

载体特色:

1、携带cspA低温诱导启动子,11度低温 诱导,促进蛋白溶解,增加可溶性蛋白几率
2、携带SD序列,增加蛋白起始密码子翻译效率
3、构建TEE序列,转录增强,增加蛋白表达水平
4、AMP抗性筛选

载体特色:

1、携带cspA低温诱导启动子,11度低温 诱导,促进蛋白溶解,增加可溶性蛋白几率
2、携带SUMO融合蛋白,形成三级空间结构,有助于蛋白形成正确折叠
3、SUMO酶特异性切割融合蛋白,重组蛋白N端无氨基酸残留
4、Kan抗性筛选

  钟鼎生物为广大客户服务多年,帮助国内外客户获得数以千计的蛋白样品。在付出努力的同时,我们也收获的客户的认同与赞誉。客户在钟鼎生物提交订单后,我们不仅仅提供给客户最终的蛋白产品,同时我们提供实验中的实验试剂、耗材、方案设计、实验步骤、产生的中间实验数据以及表达菌株、表达质粒。客户可以直接使用我们的数据发表文章,无需重复蛋白表达实验。

  钟鼎生物原核蛋白表达服务,交付的不仅仅是重组蛋白产品,更多的是客户的认同。我们用最大的热忱和专业来完成客户交付的每一个订单,近年发表中英论文百余篇,用我们微薄的力量来真正的推动中国生物科研的进步!

  • Expression and purification of soluble human APRIL in Ecoli using ELP-SUMO tag.
  • Production of bioactive human beta-defensin-4 in Ecoli using SUMO fusion partner.
  • Characterizing heat shock protein 90 gene of Apolygus lucorum (Meyer-Dür) and its expression in response to different temperature and pesticide stresses.
  • Cloning and prokaryotic expression of GmNAC8 gene isolated from soybean
  • Molecular characterization and detection of a spontaneous mutation conferring imidazolinone resistance in rapeseed and its application in hybrid rapeseed production
  • Isolation and characterization of a proteinaceous α-amylase inhibitor AAI-CC5 from Streptomyces sp. CC5, and its gene cloning and expression
  • Biotic stress-induced expression of mulberry cystatins and identification of cystatin exhibiting stability to silkworm gut proteinases
  • 国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因表达载体的构建及原核表达
  • 苏云金芽胞杆菌WB5中营养期杀虫蛋白3Aa基因(vip3Aa)的克隆、表达与纯化
  • 基因工程菌诱导表达苏云金芽胞杆菌Vip3Aa蛋白的条件优化
  • 新型Resilin-R5融合蛋白的大肠杆菌表达和纯化
  • 罗非鱼无乳链球菌LrrG蛋白的原核表达及免疫原性分析
  • 猪带绦虫TSO45W-4B基因的克隆、表达和抗体制备
  • 10-HDA对意蜂幼虫发育影响及中蜂Royalactin mRNA水平和原核表达分析
  • Resilin-R5融合蛋白表达纯化及其材料性能研究

    

5天可溶性蛋白急速交付套餐
套餐特色:2500元可溶性蛋白急速交付,不成功0收费。
1. 客户供目的序列,钟鼎进行基因优化:mRNA、tRNA丰度、密码子偏爱性等多维度优化。
2. 多种表达载体供选择:PET2830a、pMAL、pCZN1、pGex、pSumo 等。
服务内容
价格
周期 交付标准 备注
·基因优化合成
市场优惠时价

WB免费检测
(周期增加2个工作日)

·蛋白表达纯化
2500元
5个工作日 1-3mg蛋白,纯度>85%
3000元
10个工作日 3-5mg蛋白,纯度>85%
3500元
10个工作日 5-10mg蛋白,纯度>85%
咨询技术支持
在线QQ技术支持2
10mg以上蛋白,纯度>85%
上清表达保证型套餐
套餐特色:5000元保证上清表达,不成功0收费。
1. 客户供目的序列,钟鼎进行基因优化:mRNA、tRNA丰度、密码子偏爱性等多维度优化。
2. 体同时构建三个载体:pCZN1、PET28a、pMAL;分别导入AE、TransB(DE)以及 BL21(DE)3plyss 三种表达菌株。
服务内容
价格
周期 交付标准 备注
·基因合成
市场优惠时价
 
·亚克隆
200元/个
     
·表达条件优化
2000元
10个工作日 分析表达图片 三个载体同时进行诱导;
如果常规条件下蛋白可溶性表达,优化不再进行,费用减半收取。
·蛋白表达纯化
3000元
5个工作日 1-3mg蛋白,纯度>85%
WB免费检测
(周期增加2个工作日)
4000元
10个工作日 3-5mg蛋白,纯度>85%
4500元
10个工作日
5-10mg蛋白,纯度>85%
咨询技术支持
在线QQ技术支持2
10mg以上蛋白,纯度>85%
原核蛋白表达验证型套餐(BP101)
客户提供 服务内容 周期 价格
验证型套餐A特色:使用客户提供的表达载体,无论表达是否成功,都收取相应的表达检测费用。
1、无污染的质粒,最小量不低于100ng
2、原始质粒图谱及序列文件
3、插入基因后质粒的商业测序报告
使用客户提供的质粒重新转化AE宿主菌,验证目的蛋白是否表达,并分析目的蛋白的表达形式(上清或包涵体表达) 2-4天 580元
验证型套餐B特色:客户提供质粒,亚克隆至钟鼎生物的特色表达载体,转化配套的菌株,表达成功后收费,不成功仅收亚克隆费。
1、无污染的质粒,最小量不低于100ng
2、原始质粒图谱及序列文件
3、插入基因后质粒的商业测序报告
使用钟鼎生物的特色质粒,转化低温AE宿主菌,验证是否表达,并分析目的蛋白的表达形式(上清或者包涵体) 1-2周 咨询QQ技术支持
在线QQ技术支持2
原核蛋白表达保证型套餐(BP102)
客户提供 服务内容 周期 价格
半包套餐:使用客户的基因模板,亚克隆至钟鼎的表达载体,如无法获得目的蛋白,仅收取亚克隆费用。
1、无污染的质粒,最小量不低于100ng
2、原始质粒图谱及序列文件
3、插入基因后质粒的商业测序报告
亚克隆至钟鼎的表达质粒,转化AE菌株,优化表达条件后,通过亲和纯化获得目的蛋白,SDS-PAGE检测,最终提供3mg,85%纯度的目的蛋白 2-3周 咨询QQ技术支持
在线QQ技术支持2
全包套餐:根据蛋白用途重新设计及合成基因序列,表达全长或部分蛋白序列,如未能获得蛋白,全免费

1、无污染的质粒,最小量不低于100ng
2、原始质粒图谱及序列文件
3、目的蛋白用途
4、重组蛋白缓冲液要求
5、蛋白分装要求

依据抗原性或活性位点截取全长或部分蛋白片段,优化基因序列。使用基因合成方法构建表达质粒,,转化AE菌株,优化表达条件后,通过亲和纯化获得目的蛋白,通过SDS-PAGE检测,最终提供3mg,85%纯度的目的蛋白 3-4周

如未能获得目的蛋白
基因免费、蛋白免费

咨询QQ技术支持
在线QQ技术支持2

钟鼎生物会依据蛋白的跨膜结构域、蛋白的抗原性、蛋白的亲疏水性等多参数对蛋白进行分析,结合客户的实验目的,确认截断方案和亚克隆方案。某些生理毒性蛋白和膜蛋白,不在套餐承诺免费之列。

 

大肠杆菌原核表达步骤及交付标准
1、表达体系系统选择(客户提供表达菌株的略过此步骤,仅提供表达质粒的可选择宿主菌)
1.1、可选表达载体
低温诱导启动子载体:pCzn1-His,pSumo-Mut;
常规商业化载体:pET26,pET28,pET32等系列;pGEX-4T,
pGEX-6T等系列;pMAL等系列
1.2、可选表达菌株
Arcti Express低温诱导菌株系列
Origami高表达菌株系列
Rosetta-GAMI稀有密码子兼容性菌株系列
2.1 表达质粒构建 周期 交付数据及材料 报价
  • 基因优化
  • 亚克隆设计
  • 合成基因
  • 亚克隆至载体

载体构建
2-3周

1、基因合成报告
2、测序验证报告
3、包含表达质粒的大肠杆菌DH5a
4、表达质粒
5、质粒说明书

大肠杆菌原核蛋白表达服务属于科研型服务项目,为了给您提供更专业、细致的服务支持

请联系order@zoonbio.com

免费电话
400-066-8086

咨询QQ技术支持
在线QQ技术支持2

2.2 蛋白表达小试分析鉴定    
  • 转化
  • 表达小试
  • 表达分析鉴定
  • 扩大培养
表达鉴定
1周
6、阳性表达菌株
7、小试表达流程报告
8、小试表达分析原始图片
9、小试表达总结
2.3 蛋白表达纯化    
  • 蛋白亲和纯化(上清)
  • 包涵体蛋白变复性
  • WB鉴定纯化后蛋白
  • PFM检测(可选)
  • MS检测(可选)
表达纯化
1-2周
10、蛋白纯化流程报告
11、蛋白纯化原始图片
12、发货蛋白
13、Western Blot(标签抗体)
14、蛋白指纹图谱(可选)
15、蛋白质谱分子量(可选)
2.4 发酵罐放大培养    
  • 放大培养(10-20L)
  • 放大培养(50L以上)
发酵培养
3-4周
16、蛋白纯度鉴定报告
17、成品蛋白(依据表达小试结果约定价格)

  本案例基于钟鼎生物原核表达质粒pCzn1-His+Arctic Express低温诱导体系,使用基因合成的方法构建低温诱导表达表达载体,转化Arctic Express表达菌株,通过SDS-PAGE检测蛋白的表达情况,并通过Ni柱的亲和纯化获得目的蛋白。未经钟鼎生物授权,任何单位及个人不得转载或盗用,违者必究!

大肠杆菌原核蛋白表达订单前分析工作:
我们使用钟鼎生物专利的Codon_Score2.0软件分析待表达蛋白的基因序列,其中绿色是频率正常的密码子(使用频率>20%),灰色是使用频率低于20%的密码子,红色表示使用频率低于10%的密码子,针对大肠杆菌宿主细胞优化基因序列。同时会对蛋白的亲疏水性和跨膜结构域分析,在不影响功能的基础之上,会选取部分或者全部的蛋白序列表达,制定表达成功率最高的实验方案。

毕赤酵母蛋白表达前分析

一、实验设计
依据客户提供的蛋白序列,优化密码子使之更适宜在大肠杆菌中表达,采用全基因合成的方法合成基因XXX,经目的基因亚克隆至pCZn1载体的多克隆位点区域,N端携带6XHis标签蛋白,获得的质粒经酶切及测序验证无误后,转化Arctic Express表达菌株,通过SDS-PAGE检测蛋白的表达情况,并通过Ni柱的亲和纯化获得目的蛋白。

二、试剂和耗材(略),培养基配方如下(略)

三、主要实验仪器 (略)

四、实验方法及结果
1、pCZn1-XXX质粒构建
采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法合成基因HPH-2,双酶切连接至pCznI载体的NdeI和XbaI之间;挑取阳性克隆子测序,测序结果如下所示,紫红色显示为设计的酶切位点,双划线区域为His-Tag序列,单划线区域为XXX基因区域(序列略)

使用Chromas软件查看测序峰图文件,截取部分序列示例如下
原核表达质粒测序

测序拼接序列与理论序列相比对,结果显示获得序列与理论序列100%匹配,比对文件截图如下所示
原核表达质粒序列比对

pCzn1-XXX质粒图谱与酶切实验图分别如下
原核表达质粒酶切鉴定

2、pCzn1-HPH-2载体转化至大肠杆菌ArcticExpress(DE3)
1. 将质粒0.1 μg(约5ul)加入100 μl ArcticExpress(DE3) 感受态细菌中,置冰上20min;
2. 42℃热激90 sec,迅速置冰中5 min;加入600 μl 37℃预热的LB培养液;
3. 37℃,220 rpm振摇1 h,离心后全部涂布于含50 μg/ml Amp的LB平板,37℃倒置培养过夜。

3、IPTG诱导pCzn1-XXX2载体融合蛋白的表达
1. 挑取转化平板上的单克隆接种于含50 μg/ml Amp的3 ml LB培养液的试管中,37℃ 220 rpm振摇过夜;
2. 次日按1:100接种于50 μg/ml Amp的30 ml LB培养液中,37℃ 220 rpm振摇至菌体OD600为0.6 (约2h);
3. 取出1 ml培养物,10000g室温离心2 min,弃上清,用100 μl 1×上样缓冲液重悬菌体沉淀;
4. 向剩余的培养物中加入IPTG至终浓度为0.5 mM,37℃ 220 rpm振摇4 h,诱导HPH-2融合蛋白表达;
5. 取出1 ml培养物,12000g室温离心2 min,弃上清,用100 μl 1×上样缓冲液重悬菌体沉淀。
6. 进行10% SDS-PAGE分析, 结果如Fig.1所示。

4、XXX-His融合蛋白的纯化
1. 将诱导表达的培养菌体沉淀用20 ml Ni-IDA Binding-Buffer重悬后,超声破碎(功率400 W,工作4 sec,间歇8 sec,共20 min),
4℃ 10000g离心20 min,取上清;
2. 利用低压层析系统,上清液以0.5 ml/min流速上样至Ni-IDA Binding-Buffer预平衡的Ni-IDA -Sepharose CL-6B亲和层析柱;
3. 用Ni-IDA Binding-Buffer以0.5 ml/min流速冲洗,至流出液OD280值到达基线;
4. 用Ni-IDA Washing-Buffer(20 mM Tris-HCl,20 mM咪唑,0.15 M NaCl,pH8.0)以1 ml/min流速冲洗,至流出液OD280值到达基线
5. 用Ni-IDA Elution-Buffer(20 mM Tris-HCl,250 mM咪唑,0.15 M NaCl,pH8.0)以1 ml/min流速洗脱目的蛋白,收集流出液;
6. 将上述收集的蛋白溶液加入透析袋中,使用PBS(PH7.4)进行透析过夜;
7. 进行10% SDS-PAGE分析, 结果如Fig.2所示。

原核蛋白表达鉴定与纯化

5、蛋白质鉴定
对纯化后的蛋白,依据合同约定,进一步验证蛋白质的正确性,可选的方法有western blot, MS(分子量质谱),PFM(肽指纹图谱)具体的实验案例请参照对应的服务项目,此处省略。

补充说明:
我们使用低温诱导表达体系,可以有效的提高可溶性蛋白的比率。在尊重科研事实的基础之上,我们无法承诺所有的蛋白都可以成功表达或以上清的形式表达。由于原核的低等生物特性,不可能像真核细胞一样赋予蛋白天然的空间空间构象和天然活性,因此我们也不承诺获的蛋白具有客户预期的生理学活性。

钟鼎生物资质

合同模板下载

原核系统蛋白表达技术服务 原核蛋白表达技术服务合同模板 原核蛋白表达技术支持 专业的原核蛋白表达技术支持为您服务

猜您所需

DNA/RNA核酸提取服务 反转录RT-PCR钓取基因 同工酶检测分析 蛋白质解析 质粒抽提服务 蛋白HPLC纯度分析 哺乳动物细胞蛋白表达 原核蛋白表达服务

更多服务直接电话联系技术支持 400-066-8086,Email至 order@zoonbio.com咨询,或在线咨询:QQ技术支持2 QQ技术支持3