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公司新闻

1、热烈祝贺钟山生命科学园更名,园区环境大幅改善。

2、2015年12月,钟鼎生物正式获批“企业研究生工作站”,“江苏省高科技企业”等一系列称号。

3、2015年8月,钟鼎生物正式获批“国家级高新科技企业”殊荣。more

Southern Blot印迹杂交检测-DIG探针标记 技术客服

    Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的方法。其原理为利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的DIG标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。

    钟鼎生物自建立Southern Blot杂交服务平台以来,帮助客户完成过拟南芥、大豆、烟草、苎麻、 玉米、棉花、水稻、油菜等多物种检测,成功发表数十篇高水平论文,钟鼎生物的探针使用DIG(地高辛)标记,具有低噪、高敏、无放射性污染等优点,实验过程中保留原始数据和实验材料,数据真实可信,具有可重复性。我们使用传统的胶片曝光与最先进的自动化学发光成像检测系统相结合,确保捕获最佳信噪比的成像时间点,可以交付给客户品质最好的实验结果,客户可直接使用钟鼎生物提供的southern blot实验数据向高水平的杂志投稿。

Southern Blot服务报价

Southern Blot服务
服务编号 服务说明 服务内容 服务周期 服务报价
BM601 地高辛(DIG)探针标记 PCR法DIG探针标记/基因,灵敏度检测 1周

技术支持客服

BM602 Southern杂交检测 8个样品+1个阳性对照+1个Marker(一张膜) 1-2周

说明:客户自备样品的,请提供高质量的DNA样品。如果需要钟鼎生物帮助提取DNA样品,请提供新鲜的细胞、组织或菌液,我们会酌量加收部分服务费用。

 

southern blot服务标准

客户提供材料

1、待杂交目标基因序列和含有待杂交基因的阳性质粒,我们会依据Southern blot实验要求重新选择全长或部分区域作为探针序列,使用PCR法标记地高辛探针。

2、待杂交的高质量DNA样品质量至关重要,决定实验的成败,请确保DNA抽提质量,尽量采用进口试剂盒提取或委托钟鼎生物提取。
  A、基因组DNA检测:OD260/OD280=1.8-2.0,基因组要求DNA总量不小于10ug,浓度大于50ng/ul;
  B、请提供基因组DNA检测图片,要求无降解,无蛋白污染,电泳检测标准请参考southern blot实验案例
  C、检测样品低温运输至公司,或交给当地的业务员或代理商处理

3、客户如果无法提供高品质的基因组DNA样品,钟鼎生物可以帮助制备可用于Southern Blot检测的DNA样品,客户提供样品要求如下:
  A、菌液:不低于500ul,冰袋或者干冰运输
  B、组织:总量不小于100mg,干冰运输
  C、细胞:提供新鲜的细胞即可,尽量不要使用盐溶液冲洗

4、请注明基因组DNA酶切方案,如果项目中需要用到非常规的限制性内切酶,需额外加收酶切费用或有客户提供相应的限制性内切酶。

Southern Blot实验流程

1、制备待测DNA
2、DNA限制酶消化
3、琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品
4、电泳凝胶预处理
5、转膜
6、探针标记
7、预杂交
8、Southern杂交
9、洗膜
10、放射性自显影检测
11、实验结果分析及报告

 

Southern Blot服务发货文件
钟鼎生物负责对客户提供样品进行DIG探针标记与Southern杂交检测技术服务,最终提供检测报告及检测图片

1、DNA样品检测报告(实验样品不返还,请注意保留备份)
2、标准实验流程报告
3、southern blot实验结果检测报告
4、如果是实验有额外的要求,请提前致电或邮件说明

 

southern-blot

在钟鼎生物的帮助下,客户获得清晰、低噪、客观真实的实验结果,看到客户文章的发表,我们与有荣焉!

Ecdysone receptor isoform-B mediates soluble trehalase expression to regulate growth and development in the mirid bug, Apolygus lucorum (Meyer-Dür) Insect Mol Biol. 2015 Sep 3.
Effects of a miR-31, Runx2, and Satb2 regulatory loop on the osteogenic differentiation of bone mesenchymal stem cells. Stem Cells Dev. 2013 Aug 15;22(16):2278-86
Overexpression of a maize WRKY58 gene enhances drought and salt tolerance in transgenic rice. Plant Cell Tiss Organ Cult,2014, 119:565-577.

文章发表后,请记得与我们一起分享喜悦,我们会送上贴心的祝福。文章正文中明确提出钟鼎享受现金奖励!

southern blot服务案例

Southern Blot 实验案例:

一、 试剂、耗材
1、 PCR DIG Probe Synthesis Kit:Roche公司,货号11636090910;
2、 地高辛杂交检测试剂盒II (化学发光法):Roche公司,货号11585614910;
3、 EcoR I:TaKaRa公司,货号D1040A;
4、 Hind III:TaKaRa公司,货号D1060A;
5、 1Kb DNA Ladder:钟鼎公司,货号DM1201;
6、 AL2000 DNA Marker:钟鼎公司,货号DM0101;
7、 HyBond N+正电荷尼龙膜:Amersham公司,货号RPN303B;
8、 引物:SNB015-F,SNB015-R,客户提供;
9、 样品:基因组DNA1、2、3、4、5、6、7、64R阴性,含目的基因的阳性质粒;
10、 DNA Molecular-Weight Marker,DIG-labeled:Roche公司,货号11218590910。
二、仪器设备(略)
三、试剂及配制 (略)
四、探针制备
1、采用PCR制备探针模板 PCR体系(略) PCR反应程序如下(略):
2、琼脂糖凝胶电泳
PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,结果如下图1所示:

southern 探针制备

五、基因组DNA的提取和酶切
1、采用CTAB法大量植物基因组DNA快速提取试剂盒(钟鼎公司,货号DN15-10T),提取不同材料的基因组DNA,电泳检测如下组系列图所示:

2、对基因组进行酶切,依据不同的酶,设置不同的酶切体系(详细酶切方案在具体订单中明确阐述,此处省略),电泳检测酶切产物,如下左图所示:
六、质粒酶切,根据实际情况设计酶切体系,取20 ul,进行1%琼脂糖凝胶电泳,如下右图所示:

southern blot基因组酶切
七、电泳
将制备好的样品进行0.7%的琼脂糖凝胶电泳,25V恒压、低温、过夜。
八、转膜
1、 将胶置于平皿、用蒸馏水冲洗一次后,加入数倍体积变性液室温振荡45 min。
2、 用蒸馏水冲洗2次。加入中和液室温振荡2×15 min。
3、 用蒸馏水冲洗2次。加入2×SSC以平衡凝胶和带正电荷的尼龙膜5 min。
4、 向上毛细管法进行转膜20 h。取下膜作好标记,在 2×SSC中漂洗一次,80℃烘烤固定2 h。
九、杂交
1、 预杂交:取10.0 ml Hyb-100,加入杂交管中,37℃预杂交2h。
2、 探针变性:探针在PCR仪中100℃变性10分钟,立即放冰水浴冷却5min。
3、 杂交:排尽预杂交液,在10.0ml Hyb-100)加入20ul新变性好的探针,混匀。 37℃杂交过夜。

十、洗膜、信号检测
1、 杂交后室温下,20 ml 2×SSC/0.1%SDS 洗膜2×5 min。
2、 65℃,20 ml 1×SSC/0.1%SDS洗涤2×15 min。
3、 再将膜置于20 ml洗涤缓冲液中平衡2-5 min。
4、 将膜在10 ml封闭液中封闭30 min(在摇床上轻轻摇动)。
5、 Anti-Dig-AP在10000 rpm下离心5 min。离心后将Anti-Dig-AP用封闭液稀释(1∶5000),2.0 ul Anti-Dig-AP加入10
ml 封闭液混匀。
6、 封闭完成后倒出封闭液,加入稀释好的10 ml抗体溶液,浸膜至少30 min。
7、 去除抗体溶液,用20 ml 洗涤缓冲液缓慢洗膜2次,每次15 min。
8、 在膜的正面(核酸面)滴加1 ml 的CSPD,隔绝空气15-25℃反应5 min,去除多余的液体,37℃孵育10 min。
9、 在暗房用X-ray film曝光,显影,定影,洗片,曝光记录结果。

southern 杂交实验结果

1、上述实验图片为钟鼎生物精选的比较好的实验结果,为原始曝光胶片扫描,部分结果已见稿。
2、由于样品不同,即使是同一物种的实验材料,我们不承诺所有客户的订单都可以达到上述图片效果。
3、拒绝PS,钟鼎生物可提供曝光的原始胶片,确保实验结果真实可靠,可寻求有实力的第三方实验室验证。

为了保证southern blot实验结果的准确性与美观性:

1、我们使用传统的胶片曝光与最先进的自动化学发光成像检测系统相结合,确保捕获最佳信噪比的成像时间点,可以交付给客户品质最好的实验结果。
2、除去Marker和阳性对照,我们建议样品数量不要超过8个,样品太多会导致边缘变形。
3、曝光时间太短,弱带无法显示,曝光时间太长,背景会很高,因此我们会调整曝光时间,分别提供1小时、2小时、过夜等不同时间的曝光片,确认实验的结果的准确性。
4、southern blot的灵敏度是有限的,丰度太低的片段无法被检测出来,我们以内参作为实验依据,同时也作为收费依据。

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