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1、热烈祝贺钟山生命科学园更名,园区环境大幅改善。

2、2015年12月,钟鼎生物正式获批“企业研究生工作站”,“江苏省高科技企业”等一系列称号。

3、2015年8月,钟鼎生物正式获批“国家级高新科技企业”殊荣。more

Western Blotting检测(蛋白印迹杂交)技术支持 技术支持

Western Blotting(蛋白印迹杂交)又称免疫印迹(immunoblotting),是利用抗原抗体反应,进行蛋白检测的常用方法之一。Western Blot方法非常成熟,大多实验室均具备Western Blot的实验能力。但是要得到一份背景清晰、条带明亮、真实客观的实验结果,需要投入大量的时间和精力,钟鼎生物技术人员,在样品处理、转印和抗体稀释比例等操作上具有特殊的技巧,能够为客户的样品量身定制实验方案。

Western Blotting实验周期与费用

Western Blotting检测技术服务
服务编号 服务项目 周期 报价
BA401 Western Blotting检测技术服务 1-2周 1280元/膜(8个样品)
BA402 Western Blotting检测技术服务(含内参) 1-2周 1480元/膜(8个样品)
用户需自己提供一抗,或由钟鼎生物代购。我们免费提供标记二抗和内参抗体α-Tublin,β-actin,GAPDH。


Western Blot实验流程

1、蛋白质抽提
A、实验对象为组织样品,取适量(250-500mg)新鲜组织样品,加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白。
B、实验对象为细胞样品,每份样品取1×106~1×107细胞,PBS清洗细胞,去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)抽提总蛋白。
2、蛋白质定量
按KCTMBCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。
3、变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)
将准备好的样品液和生物素标记的蛋白质分子量标准分别上样,标准加进第一个孔中,电泳分离蛋白。
4、蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜
5、膜的封闭和抗体孵育
A、膜在5%BSA溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
B、封闭过的膜加入一级抗体室温孵育1.5小时,抗原抗体结合。
C、加入HRP标记的二级抗体以结合一级抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量标准,室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。
6、结果检测
化学发光法检测,膜与化学发光底物孵育,经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件,并用ImageJ分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
7、数据分析
目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差,所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8、提供实验报告
包括详细的实验方法及Western Blot实验结果。

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